cara subkultur

Subkultur

Alat dan bahan                            :

·         Skalpel

·         Mangkuk stainless

·         Pinset 

·         Lampu spiritus

·         Korek tembak

·         Ember

·         Laminar Air Flow Cabinet

·         Planlet jati

·         Tissue steril

·         Kertas steril

·         Alkohol 70 %

·         Alkohol 95 %

·         Mata pisau

·         Media SK 1

·         Kertas label

Prosedur                                           :

1.       Siapkan semua alat dan bahan.

2.       Sterilisasi Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) dengan menyalakan lampu ultra violet (UV) selama minimal 30 menit sebelum digunakan.

3.       Cuci tangan sampai bersih menggunakan sabun dan semprot tangan menggunakan alkohol 70 % sebelum bekerja di dalam LAF.

4.       Matikan lampu UV dan semprotkan alkohol 70 % secara merata pada permukaan di sekitar LAFC dan keringkan dengan tissue.

5.       Masukkan akuades steril, alat-alat diseksi steril, lampu bunsen, dan media kultur yang telah disemprot alkohol 95 % ke dalam LAFC lalu nyalakan lampu TL dan blower.

6.       Bukalah pembungkus alat-alat diseksi dan mangkuk stainles serta petridisk, semprot dengan alkohol 95 % lalu bakar dan biarkan sampai apinya padam.

7.       Nyalakan lampu spirtus dan buka penutup botol alkohol 95 %.

8.       Ambil kertas steril sebanyak 2 lembar, panaskan sebentar di atas api bunsen dan letakkan di atas alas kaca steril.

9.       Ambil planlet jati dengan menggunakan pinset lalu letakkan di atas potongan kertas steril.

10.   Potong planlet jati menggunakan pisau ± 1-2 cm.

11.   Ambil media SK 1 buka tutupnya, lalu buang air yang berada dalam media kultur tersebut.

12.   Tanam potongan planlet jati dalam media SK 1 sebanyak ± 5 planlet/ botol media sedalam ± 0,5-1 cm.

13.   Tutup botol kultur hasil subkultur serapat mungkin untuk meminimalkan resiko terjadinya kontaminasi. 

14.   Beri label (jenis tanaman, bagian tanaman yang diambil, jenis media, tanggal tanam), kemudian menyimpannya di ruang pertumbuhan.

15.   Bersihkan pinset dan pisau skalpel dengan air aquades steril, celupkan pada alkohol 95 %, bakar dan simpan di atas mangkuk stainless.

16.   Buang sampah yang ada di dalam LAFC dan matikan lampu TL dan blower LAFC .

17.   Cuci alat-alat gelas dan diseksi yang telah digunakan untuk subkultur.